Метка эритроцитов. Непосредственно перед исследованием из вены пациента берут 20 мл крови в стерильный пластикатный мешок или завальцованный флакон емкостью 100 мл, куда предварительно наливают 1000 ЕД гепарина (ЕД в объеме 0,2 мл). К взятой крови добавляют раствор натрия хромата, 51Cr. Инкубацию эритроцитов с изотопом производят в течение 30 мин при комнатной температуре, периодически осторожно перемешивая взвесь клеток. По окончании метки кровь центрифугируют со скоростью 1000 об/мин в течение 15 мин, затем производят наиболее полное удаление плазмы. Меченые эритроциты однократно отмывают путем добавления в пластикатный мешок или завальцованный флакон 100 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Взвесь эритроцитов осторожно перемешивают, центрифугируют в течение 15 мин при тех же условиях, надосадочную жидкость удаляют. Перед реинфузией взвесь эритроцитов разбавляют 0,9% раствором натрия хлорида.
Метка лейкоцитов или тромбоцитов. Раствор натрия хромата, 51Cr добавляют к выделенной лейкоцитарной или тромбоцитарной массе из расчета 0,07–0,1 МБк/мл. Смесь осторожно перемешивают и инкубируют при температуре 37,5 °C в течение 30 мин. После окончания инкубации клеточную взвесь лейкоцитов центрифугируют со скоростью 760 об/мин в течение 15 мин, а клеточную взвесь тромбоцитов — со скоростью 3200 об/мин также в течение 15 мин. Надосадочную жидкость, содержащую не связавшийся с клетками хром-51, удаляют и замещают равным объемом плазмы.
Активность вводимого пациенту раствора составляет: при определении объема циркулирующих или депонированных эритроцитов, продолжительности жизни эритроцитов, лейкоцитов или тромбоцитов — 3,7 МБк, а при выявлении скрытых желудочно-кишечных геморрагий — 11,1 МБк.
Методы исследования
Определение объема циркулирующих эритроцитов. Эритроциты, меченные хромом-51, вводят в/в пациенту. Часть их используют для приготовления стандарта (1 мл суспензии эритроцитов разводят в 100 мл 0,1% раствора стабильного хромата натрия). Через 15 мин после инъекции из локтевой вены противоположной руки пациента гепаринизированным шприцом забирают 10–15 мл крови, из которой 2 мл используют для определения гематокрита, а остальную порцию — для радиометрии в колодезном счетчике.
Объем циркулирующих эритроцитов рассчитывают по следующей формуле:
ОЦЭ = Nct × D × V × Ht/Nob,
где Nct — активность стандарта (имп/мин/мл);
D — разведение (100);
V — объем введенной суспензии в мл;
Ht — исправленный гематокрит;
Nоb — активность образца крови на 15 мин (имп/мин/мл).
Для определения объема депонированных эритроцитов берут пробы крови через 10, 20, 40 и 60 мин после в/в введения меченных хромом-51 эритроцитов. В пробе на 10 мин (быстро циркулирующий объем эритроцитов) и в пробе, взятой в период плато радиоактивности крови (t) по вышеприведенной формуле рассчитывается ОЦЭ. Различие показателей ОЦЭ на 10-й мин и в момент t соответствует объему депонированных эритроцитов (в мл).
Определение продолжительности жизни эритроцитов. Через 2, 3, 7, 10 сут после в/в введения меченных хромом-51 эритроцитов из вены пациента берут 12 мл крови в гепаринизированные пробирки. Сразу после взятия крови 10 мл переносят в счетную пробирку и гемолизируют сапонином. Радиометрию проб крови производят в колодезном счетчике.
Активность пробы, взятой через 2 дня, принимают за 100%, а остальных образцов — выражают в процентах к этой пробе. Полученные величины наносят на полулогарифмическую систему координат, в которой на оси абсцисс откладывают время в сутках в линейном масштабе, а на оси ординат — радиоактивность в процентах в логарифмическом масштабе. По усредненной прямой находят время снижения радиоактивности на 50% (Тбиол), что и является показателем продолжительности жизни эритроцитов, который в норме составляет 22–31 день.
Определение желудочно-кишечных кровотечений. В течение 1 ч после в/в введения меченных хромом-51 эритроцитов и через каждые 2 сут в течение 8 сут из вены противоположной руки пациента берут по 10 мл крови в гепаринизированные пробирки. После введения меченных эритроцитов больной собирает кал примерно суточными порциями, которые помещают в смеситель с крышкой и перемешивают с добавлением воды. Объем полученной в смесителе взвеси кала измеряют с помощью мерной посуды.* Пробы крови и кала в объеме по 10 мл радиометрируют в колодезном счетчике.
Расчет количества крови в кале проводят по следующей формуле:
Акр =(Nkal/Nkr) × V, где:
Акр — количество крови в исследуемом кале (мл);
Nkal — активность 1 мл взвеси кала (имп./мин);
V — общее количество взвеси исследуемого кала (мл);
Nkр — активность 1 мл крови в начале изучаемого периода (имп./мин).
*При наличии колодезного счетчика с большой емкостью кристалла (500 мм3) радиометрируют весь объем суточной порции кала, избегая процедуру измерения его объема. Тогда достаточно радиоактивность всего объема кала разделить на радиоактивность 1 мл крови для получения величины суточной кровопотери.
Определение продолжительности жизни лейкоцитов или тромбоцитов. Через 1 ч после реинфузии меченых клеток каждые 2 ч в течение 1 сут берут 3–4 пробы крови по 5 мл из локтевой вены противоположной руки пациента. Затем ежедневно в течение 7–8 сут забор проб крови повторяют. Забор крови осуществляют до фактически полного исчезновения радиоактивности в кровяном русле. Этот период времени рассматривают как продолжительность жизни клеток. В норме для тромбоцитов она составляет 7–8 сут, а для лейкоцитов — 12–13 сут.
Лучевые нагрузки на органы и все тело пациента при использовании препарата Натрия хромат, 51Cr (в зависимости от носителя нуклида)
